細(xì)胞培養(yǎng)幾乎是所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。其中，細(xì)胞傳代是將部分細(xì)胞分離出來，重新接種到新的培養(yǎng)皿中，使細(xì)胞重新獲得足夠的營養(yǎng)條件和生長空間的過程。那么你知道細(xì)胞傳代培養(yǎng)的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

　　1、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代

　　通常當(dāng)細(xì)胞生長至w全匯合進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞生長過密，對于特殊情況，比如有接觸抑制的細(xì)胞，一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，避免引起細(xì)胞分化。

　　2、貼壁細(xì)胞胰酶消化如何控制時(shí)間

　　貼壁細(xì)胞培養(yǎng)一個(gè)關(guān)鍵步驟胰酶消化，消化過度會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞碎片增多，細(xì)胞成片脫落，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的胰酶流失，消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打造成細(xì)胞損傷，活性下降。

　　一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要對于新購買的細(xì)胞，可以先用低濃度的胰酶去摸索一下消化時(shí)間，可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓，記錄最佳消化時(shí)間，下一次操作參考之前的記錄來控制時(shí)間即可。

　　3、如何看活細(xì)胞

　　可通過顯微鏡觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細(xì)胞較暗?；蛲ㄟ^臺(tái)盼藍(lán)染色來計(jì)算細(xì)胞活力，活細(xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的，可直接用計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。

　　4、細(xì)胞傳幾代開始死亡或細(xì)胞存活率不佳，增值變慢

　　可能是培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳；或者消化過度，對細(xì)胞有嚴(yán)重影響；或者是傳代比例不合適；細(xì)胞存在污染等。

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