NEB向研究界提供限制性?xún)?nèi)切酶超過(guò)45年， 多年來(lái)，NEB不斷努力開(kāi)發(fā)出純度最高、性能無(wú)yu倫bi的酶。

NEB限制性?xún)?nèi)切酶分為五大類(lèi)別，分別是：高保真限制性?xún)?nèi)切酶、Homing 核酸內(nèi)切酶、Nicking核酸內(nèi)切酶、表觀(guān)遺傳學(xué)分析中的限制性?xún)?nèi)切酶、省時(shí)有效的限制性?xún)?nèi)切酶。

1、高保真限制性?xún)?nèi)切酶簡(jiǎn)介

高保真限制性?xún)?nèi)切酶是通過(guò)交換功能性氨基酸殘基，然后篩選在廣泛條件下發(fā)揮作用的最佳突變體而設(shè)計(jì)的。無(wú)論你是將消化物放置5-15分鐘還是過(guò)夜，或者使用不同量的酶，高保真限制性?xún)?nèi)切酶都能確保你所需的性能。

2、Homing 核酸內(nèi)切酶

Homing 核酸內(nèi)切酶是雙鏈DNA酶，具有大的不對(duì)稱(chēng)識(shí)別位點(diǎn)（12-40個(gè)堿基對(duì)）和通常嵌入內(nèi)含子或內(nèi)含子的編碼序列。內(nèi)含子是由前體RNA剪接而成，而內(nèi)含子則由前體蛋白質(zhì)剪接而成。歸位核酸內(nèi)切酶是使用類(lèi)似于限制性核酸內(nèi)切酶的慣例命名的，其內(nèi)含子編碼的核酸內(nèi)切酶包含前綴“I-"，而內(nèi)含子編碼核酸內(nèi)切酶則包含前綴“PI-"。

Homing 核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)極其罕見(jiàn)。例如，在隨機(jī)序列的每7 x 10¹⁰個(gè)堿基對(duì)中，18個(gè)堿基對(duì)的識(shí)別序列將僅出現(xiàn)一次。這相當(dāng)于20個(gè)哺乳動(dòng)物大小的基因組中只有一個(gè)位點(diǎn)。然而，與限制性?xún)?nèi)切酶不同，歸巢性?xún)?nèi)切酶在其識(shí)別序列內(nèi)容忍一些序列退化。也就是說(shuō)，單堿基的改變并沒(méi)有消除裂解，而是在不同程度上降低了裂解的效率。結(jié)果，它們觀(guān)察到的序列特異性通常在10-12個(gè)堿基對(duì)的范圍內(nèi)。

3、Nicking核酸內(nèi)切酶

Nicking核酸內(nèi)切酶與限制性核酸內(nèi)切酶一樣使用簡(jiǎn)單。由于6或7堿基缺口內(nèi)切酶產(chǎn)生的缺口不會(huì)使DNA片段化，因此通過(guò)將超螺旋質(zhì)粒轉(zhuǎn)化為開(kāi)環(huán)來(lái)監(jiān)測(cè)它們的活性。或者，可以使用在相反的線(xiàn)束上具有足夠近的缺口位置以形成雙絞線(xiàn)切割的基板。

4、表觀(guān)遺傳學(xué)分析中的限制性?xún)?nèi)切酶

許多限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)DNA甲基化狀態(tài)敏感。當(dāng)識(shí)別位點(diǎn)中的特定堿基被修飾時(shí)，裂解可能被阻斷或受損。NEB的科學(xué)家最近鑒定了MspJI（NEB#R0661）限制性?xún)?nèi)切酶家族，該家族依賴(lài)于甲基化和羥甲基化才能發(fā)生切割。這些酶切除了約32個(gè)堿基對(duì)片段，這些片段包含一個(gè)位于中心的5-mC或5-mC修飾的殘基，可以提取并測(cè)序。由于這種表觀(guān)遺傳學(xué)修飾的已知位置，在下游分析之前不需要亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。這些表觀(guān)遺傳學(xué)標(biāo)記驗(yàn)證的甲基化依賴(lài)性限制性?xún)?nèi)切酶擴(kuò)大了繪制表觀(guān)遺傳學(xué)修飾的潛力，并簡(jiǎn)化了DNA甲基化的研究。此外，它們?yōu)楦玫亓私?-羥甲基胞嘧啶在基因組中的作用提供了機(jī)會(huì)。

我們現(xiàn)有的幾種限制性?xún)?nèi)切酶也可用于研究DNA的表觀(guān)遺傳學(xué)修飾，如識(shí)別相同序列但不同甲基化模式的DpnI（NEB#R0176）和DpnII（NEB#R0543）。McrBC也只在一條或兩條鏈上切割甲基化胞嘧啶的DNA。MspI（NEB#R0106）和Hpall（NEB#R0171）識(shí)別相同的序列（CCGG），但對(duì)不同的甲基化狀態(tài)敏感。Hpall只切割一個(gè)wanquan未修飾的位點(diǎn)：胞嘧啶上的任何修飾（5-mC、5-mCo或5-ghmC）都會(huì)阻斷切割。MspI會(huì)識(shí)別并切割5-hmC和5-hmC，但不會(huì)識(shí)別和切割5-ghmc。這些酶包含在EpiMark®5-mC和5-mC分析試劑盒（NEB#E3317）中。

5、省時(shí)有效的限制性?xún)?nèi)切酶

在NEB，酶的生產(chǎn)與限制性修飾系統(tǒng)的克隆和過(guò)表達(dá)的基礎(chǔ)研究有關(guān)。這一重點(diǎn)使我們能夠提供濃度極gao的酶，為您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供更大的靈活性。

無(wú)論您是快速篩選大量克隆還是設(shè)置過(guò)夜消化，您都將受益于我們的高質(zhì)量酶。通常，限制性消化包括將1µl酶與1µg純化DNA在50µl的最終體積中孵育1小時(shí)。然而，為了加快篩選過(guò)程，請(qǐng)選擇一種符合時(shí)間節(jié)約標(biāo)準(zhǔn)的NEB酶。在推薦的反應(yīng)條件下，使用1µl的酶，這些酶將在5-15分鐘內(nèi)消化1µg的底物DNA，也可以安全地用于過(guò)夜消化。與其他供應(yīng)商不同，沒(méi)有特殊的配方、濃度變化或需要購(gòu)買(mǎi)更昂貴的新酶系才能在5-15分鐘內(nèi)完成消化，也不必?fù)?dān)心孵化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

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